产品概述

T7 RNA聚合酶是一种来源于T7噬菌体的一种依赖于DNA的RNA聚合酶，具有DNA聚合酶活性和较强的3′→5′核酸外切酶活性。T7 RNA聚合酶对T7启动子具有较高的特异性，能够以T7启动子下游序列为模板合成大量的RNA。

运输与保存方法:≤0℃运输；-25～-15℃保存。

单位定义:在标准反应体系下，37℃1 h内将1 nmol的ATP掺入酸性不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位（U）。

质量控制

?核酸内切酶残留检测：50μL反应体系中加入50 U本酶和1μgλDNA在37℃下孵育16 h，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。

?核酸外切酶残留检测：50μL反应体系中加入50 U本酶1μgλ-Hind III digest DNA在37℃下孵育16 h，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。

?RNase残留检测：40μL反应体系中加入40 U本酶和1μg MS2 RNA在37℃下孵育2 h，琼脂糖凝胶电泳RNA谱带不发生变化。

?DNase残留检测：40μL反应体系中加入40 U本酶和4μg pUC19 DNA在37℃下孵育16 h，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。

?热失活：75℃，20 min

反应时间：37℃孵育2 h。

反应终止：加入2μL 0.2 M EDTA(pH8.0 25℃)或者75°C加热20 min。DNA模板去除：可用DNase I(2 U)37℃处理15 min。

反应抑制剂：金属离子螯合剂、NaCl和KCl，该酶对高浓度NaCl或KCl不耐受，当其浓度

超过150 mM时，活性受到显著抑制（活性约降低50%）。

注意事项

?常规转录反应体系中NTP最适终浓度为10mM，Cap1共转录加帽体系中NTP最适终浓度为7.5 mM，实际用量应根据NTP原始浓度合理配制。

?转录反应配制应在无RNase污染的环境中完成，操作过程建议佩戴手套。使用无核酸酶的水、吸头和反应管进行体系配制。

?反应体系需要在室温下配制，避免在4°C产生沉淀。

?模板DNA线性化不完全，可能降低转录产物产量和长度。

?反应体系体积可根据实际需求按比例进行放大或缩小。