技术指标

外观：白色或微黄色无定型冻干粉末；蛋白纯度：≥90%；比活性：≥150 U/mg酶粉；过氧化氢酶：≤0.1%；蛋白酶：≤0.001%；肌酸酶：≤0.001%；ATP酶：≤0.001%；

酶学性质

来源：微生物；分类：EC 3.5.2.10；分子量：29 kDa(SDS-PAGE)；等电点：5.3；Km值：5.0×10-2 M(Creatinine)，8.0×10-2 M(Creatine)；抑制剂：Hg2+，Cu2+，Fe3+；最适pH：7.0-8.0；最适温度：65℃；pH稳定性：pH 5.5-10.0(25℃,16 h)；热稳定性：65℃以下稳定(pH 8.0,30 min)；稳定性：-25～-15℃静置保存12个月保持90%以上活性；保护剂：糖类以及BSA。

用途：水解肌酐，用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。

活性测定方法

原理：Creatinine+H2O Creatinine amidohydrolase Creatine

酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化反应生成1μmol肌酸所需的酶量。

试剂准备

试剂I：0.3 M磷酸钾缓冲液，pH 6.5。

试剂II：0.1 M肌酐溶液（1.13 g肌酐溶于100mL UP水中）。

试剂III：4%Na2CO3溶液（4.0 g Na2CO3溶于100mL UP水中）。

试剂IV：2%α-萘酚溶液（2.0 gα-萘酚溶于100 mL 99.5%乙醇中）。

试剂V：1.2 g NaOH和3.2 g Na2CO3溶于双蒸水中，定容至100 mL。

试剂VI：0.05%二乙酰溶液（0.05 mL二乙酰加水定容至100 mL）。

酶稀释液：5 mM Tris-HCl pH 8.0

操作步骤

1.在5 mL离心管中加入0.1 mL试剂I，0.8mL试剂II。

2.37℃水浴5 min。

3.加入0.1 mL待测样品，37℃孵育10 min。

4.加入2.0 mL试剂III终止反应，取出置于冰上。

5.在新的5 mL离心管中按顺序加入如下试剂：第4步的溶液80μL；双蒸水720μL；试剂IV 400μL；试剂V 400μL；试剂VI 400μL

6.25℃静置1 h后，加入2 mL双蒸水稀释。

7.用分光光度计在525 nm检测吸光度。

*用酶稀释液替代酶液，其它步骤相同，所得溶液吸光度为空白吸光度（ΔAb）ΔA=ΔAs-ΔAb

活力计算

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Vt：反应液总体积(1.0 mL)；

Vs：酶液体积(0.1 mL)；

t：反应时间(10 min)；

df：稀释倍数；

C：酶浓度(mg/mL)；

1.0：光路长度(cm)；

0.0704：标准反应条件下，生色基团在525nm处毫摩尔吸光系数(cm2/μmol)。