产品概述

酶法加帽试剂盒包含牛痘病毒加帽酶(Vaccinia Capping Enzyme)、mRNA Cap 2 ′-O-甲基转移酶（ mRNA Cap2′ -O-Methyltransferase）及其它加帽相关组分，可在无帽结构的mRNA5’端加入cap0或 cap1 结构。该结构与真核生物体内天然帽结构完全一致，可显著降低外源 mRNA 的免疫原性，增强其稳定性，并提高翻译效率。本试剂盒中的牛痘病毒加帽酶来源于携带牛痘病毒 MR 的重组大肠杆菌，该酶由D1R，D12L双亚基组成，具有三种酶活性（RNA三磷酸酶活性、鸟苷酸转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性），D1 亚基执行RNA 三磷酸酶和鸟苷转移酶的功能，D12亚基执行鸟嘌呤甲基转移酶的功能，能特异性将7-甲基鸟苷酸帽子结构(Cap 0) 加至RNA的5'端。mRNA Cap2′-O-甲基转移酶来源于携带有牛痘病毒 mRNA Cap 2′-O-甲基转移酶基因的重组大肠杆菌菌株。该酶可以利用 S-腺苷甲硫胺酸（SAM）作为甲基供体来甲基化加帽 RNA（Cap0），从而形成Cap1 结构，即在RNA的5′末端紧挨帽结构的 个核苷酸的2′-O 位置上添加一个甲基基团。Cap1加帽系统催化四种酶促反应：①RNA三磷酸酶将RNA 5'-三磷酸裂解为二磷酸。②RNA鸟苷酸转移酶将GTP连接到 RNA N1的 5'-二磷酸。③鸟嘌呤 7-甲基转移酶，使用S-腺苷甲硫氨酸作为辅助因子，催化鸟嘌呤的7-氮甲基化。④mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶 能在Cap 0-RNA 5′末端紧邻帽结构的 个核苷酸的 2′-O 上添加甲基基团。

运输与保存方法

≤0℃运输；-25℃~-15℃保存;避免反复冻融。

单位定义

Vaccinia Capping Enzyme：在 37℃条件下， 1 h 内将 10 pmol GTP 完全掺入到 80nt 转录 产物所需的酶量定义为 1 个活性单位(U)。 mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase ： 在 37℃条件下，1 h 内甲基化 10 pmol 的 80nt 带帽 RNA 转录产物所需的酶量定义 为一个活性单位（U）。